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組織原位雜交(Tissue in situ hybridization）,即原位雜交組織化學技術和原位雜交細胞化學技術
原位雜交技術的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
原位雜交雜交液
（一）雜交液內除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
（二）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。
（三）賈酰胺可使雜交溫度降低，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結構的破壞以及標本的脫落。
（四）硫酸葡聚糖能與水結合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的。
FISH技術的基本步驟包括探針制備、樣品預處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中，使用熒光標記物代替同位素標記物來標記探針。在樣品預處理過程中，細胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質等操作都是必要的，以提高探針與目標序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中，探針與樣品中的目標序列進行互補性雜交，形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細胞圖像。
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